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洁特培养基
Category: 公司新闻
Date: 2016-06-24
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1. 液体培养基贮存于4℃冰箱,避免光照,实验进行前放在37℃ 水槽中温热。

2. 液体培养基(加血清)存放期为六个月,期间glutamine可能会分解,若细胞生长不佳,可以再添加适量glutamine。

3. 粉末培养基配制(以1 升为例):

3.1. 细胞培养基通常须添加10%血清,因此粉末培养基之配制体积为900 ml,pH为7.2-7.4。NaHCO3 为另外添加,若将NaHCO3粉末直接加入液体培养基中会造成pH之误差,或局部过碱。因此粉末培养基及NaHCO3粉末应分别溶解后才混合,然后用CO2气体调整pH,而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH),因为氯离子对细胞生长可能有影响,且贮存时培养基的pH易发生改变。

3.2. 材料:

纯水(milli-Q水或二次至三次蒸馏水,水品质非常重要),粉末培养基,NaHCO3,电磁搅拌器,无菌血清瓶,0.1或0.2 mm无菌过滤膜,pH计,真空泵,CO2气体

3.3. 步骤:

  3.3.1. 取粉末培养基溶于700 ml milli-Q水中,搅拌使其溶解。

  3.3.2. 称取适量之NaHCO3粉末溶于200ml milli-Q水中,搅拌使其溶解,然后通入CO2 气体至饱和,约3-5分钟。

  3.3.3. 将溶解且含饱和CO2之NaHCO3溶液加入溶解之液体培养基中混合。混后溶液之pH应为7.2-7.4,除非pH值偏差太大,否则不需用酸碱再调整之。若为太碱,可再通入CO2气体调整pH。培养基以真空帮浦通过过滤膜时,pH会升高0.1-0.2。

  3.3.4. 以0.1或0.2 mm无菌过滤膜过滤灭菌,同时分装至无菌容器中,标示培养基种类、日期、瓶号等,贮存于4℃。(血清亦可加入培养基中一起过滤)

  3.3.5. 配制之培养基配制须作生长试验与污染测试。

附-配制培养基之生长测试

材料:

  MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)

  6-well TC plate (or 35 mm TC dish)

  methanol

  glacial acetic acid

  10 % Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013)

步骤:

  1. 以待测试培养基培养MDCKcell,接种MDCK 细胞于6-well plate (或35mm TC dish) 中,每个well 接种1 × 102 活细胞,同时作对照组实验。

  2. 接种5~7 天后,在100 倍倒立显微镜作观察细胞群落之生长,待细胞群落大到可以肉眼观察,而群落间不互相接触时即可。

  3. 去除培养基,加入1 mlCarnoy’s 固定液(甲醇:冰醋酸﹦ 3:1),室温下静置10 min。

  4. 去除固定液,水洗二次。

  5. 加入1 ml 10 %Giemsa solution,,室温下静置染色2-3min。

  6. 去除染液,水洗二次。

  7. 以肉眼计数群落数,并比较之,若新配制或新批号的培养基对细胞生长不佳,则丢弃之。


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  本文由洁特公司整理发布  www.jetbiofil.com

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