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重组蛋白A/G预装柱/填料

    通过基因重组技术,将蛋白A与蛋白G基因重组于同一质粒载体中,
    并在大肠杆菌中进行表达,得到分子量为50.5KDa的可溶性蛋白
    A/G。
    该可溶性蛋白A/G具有四个IgG结合位点,来自于蛋白A;
    和两个IgG的结合位点,来自于蛋白G。因具有上述特性,
    使得基
    因工程重组蛋白A/G具有广泛的IgG的结合能力,对各种哺乳类动
    物的IgG都能结合,使得该产品在IgG的诊断和纯化中具有十分广
    泛的用途。

    本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术,将填料
    中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化,
    使得单位体积中结合更多
    蛋白A/G,
    产品最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A或
    蛋白G、蛋白A/G
    偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化,
    或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。


  • 产品描述
  • 技术资料
    l 产品技术指标

        rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值:4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF

        rec-Protein AG分子量:50.5 KDa

        每分子rec-Protein G可结合IgG位点数:6个(4个来自于蛋白A,2个来自于蛋白G)

        rec-Protein A可结合白蛋白位点数:无

        线性流速:300-500 cm/h

       耐压指数:≤0.3 MPa(填料)

    l 注意事项
    请在实验前仔细阅读本rProtein A预装柱使用说明。同时,将所要的所有试剂、耗材拿出置于室温,恢复至室温使用。


    l  产品保存
    产品储存于2-8℃,保质期两年。

    l  rProtein A/G-Sepharose 4FF纯化IgG抗体步骤

    以下方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体,不同来源的IgG与rProteinA/ G的结合能力不同,具体情况请参考表1。

    1. 将血清或腹水样品(推荐上样量2 mL样品/mL柱)装入截留分子量3.5 KDa透析带中,于4 ℃冰箱中对1× PBS(pH 7.4)透析过夜;

    2. 将rProtein A/G-Sepharose 4FF装柱固定好,用10倍柱体积1× PBS(pH 7.4)平衡层析柱,建议流速为1 mL/min;

    3. 将透析好的样品从层析柱上端加入,建议流速为1 mL/min,为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样,重复2遍(或者是将样品1次性加入层析柱后置于摇床上,轻轻摇动,结合30 min);

    4. 样品结合后,用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱,建议流速为1 mL/min,勿让层析柱滴干;

    5. 洗脱IgG,向层析柱上端加入洗脱液(100 mM甘氨酸,pH 2.7),用预先加有100 μL中和缓冲液(1M Tris,pH 9.0)的4 mL Ep管接收,2 mL /管,共收集10倍柱体积,进行10 % SDS-PAGE电泳,确定IgG样品所在管,回收样品。

    6. 加入5倍柱体积再生缓冲液(100 mM甘氨酸,pH 2.0),再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。 向层析柱加入10倍柱体积, 20% Ethanol,于4~8 ℃冰箱。

    表1 rProtein A/G 与Ig结合能力情况

    IgG类型

    Protein A

    Protein G

    IgG类型

    Protein A

    Protein G

    人 IgG1

    ++++

    ++++

    大鼠 IgG2b

    -

    ++

    人 IgG2

    ++++

    ++++

    大鼠 IgG2c

    +

    ++

    人IgG3

    -

    ++++

    大鼠 IgM

    +/-

    -

    人IgG4

    ++++

    ++++

    兔 Ig

    ++++

    +++

    人IgA

    ++

    -

    鸡 Ig

    -

    +

    人n IgD

    ++

    -

    仓鼠 Ig

    +

    ++

    人IgE

    ++

    -

    豚鼠 Ig

    ++++

    ++

    人 IgM

    ++

    -

    牛 Ig

    ++

    ++++

    小鼠 IgG1

    +

    ++++

    ++

    ++++

    小鼠 IgG2a

    ++++

    ++++

    奶牛

    ++

    ++++

    小鼠 IgG2b

    +++

    +++

    +++

    +++

    小鼠 IgG3

    ++

    +++

    绵羊

    +/-

    ++

    小鼠 IgM

    +/-

    -

    山羊

    -

    ++

    大鼠 IgG1

    -

    +

    大鼠 IgG2a

    -

    ++++


    表2 rProtein A/G预装柱系列产品参数

    特性

    rProtein A/G

    特性

    rProtein A

    柱体积规格

    1mL,5mL

    填料稳定性

    >20纯化周期

    基质组成

    4%高交联度琼脂糖

    pH稳定性

    pH 2~11

    基质平均粒径

    90μm

    推荐工作pH范围

    pH 3~10

    功能基团

    rProtein A/G:50.5kDa;

    IgG结合位点:6个

    推荐在位清洗pH范围

    pH 2~11

    配基密度

    ≈3mg rProtein A/mL 基质

    工作温度

    4~40℃

    结合能力

    35-50mg人IgG/mL填料

    运输条件

    20%乙醇浸泡,室温运输

    推荐流速

    30~150cm/mL

    贮藏条件

    20%乙醇条件下,

    4~8℃保存