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重组蛋白A预装柱/填料

    蛋白A可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合。
    使用的rec-Protein A是通过基因工程-重组蛋白
    的方法表达获得。由于重组表达的rec-Protein A
    去除了除Fc端以外的其他非特异性结合位点,特异
    性更好。

    本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联
    技术,将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化,
    使得单位体积中结合更多蛋白A,最终纯化效率较普
    通偶联有30%的提高。蛋白A偶联填料可直接用于血
    清、腹水中IgG抗体纯化,或用于含Fc片段的重组蛋
    白的纯化。

    蛋白A可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合。使用
    的rec-Protein A是通过基因工程-重组蛋白的方法表
    达获得。由于重组表达的rec-Protein A去除了除Fc端
    以外的其他非特异性结合位点,特异性更好。

    本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联
    技术,将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化,
    使得单位体积中结合更多蛋白A,最终纯化效率较普
    通偶联有30%的提高。蛋白A偶联填料可直接用于血
    清、腹水中IgG抗体纯化,或用于含Fc片段的重组蛋
    白的纯化。


  • 产品描述
  • 技术资料

    l  产品技术指标

        rec-Protein A/Sepharose 比值:2.8~3.5mg rec-Protein A/ml Sepharose

        rec-Protein A分子量:34.85 KDa

        每分子rec-Protein A可结合IgG位点数:4个

        rec-Protein A可结合白蛋白位点数:无

        线性流速:300-500 cm/h

        耐压指数:≤0.3 MPa(填料)

    l  注意事项

    请在实验前仔细阅读本rProtein A预装柱使用说明。同时,将所要的所有试剂、耗材拿出置于室温,恢复至室温使用。

    l  产品保存

    产品储存于2-8℃,保质期两年。 

    l  rec-Protein A预装柱纯化IgG抗体步骤

    以下实验方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体,不同来源的IgG与rec-Protein A的结合能力不同,具体情况请参考表1。

    1. 将血清或腹水样品(推荐上样量2 mL样品/mL柱)装入截留分子量3.5 KDa透析带中,于4 ℃冰箱中对1× PBS(pH 7.4)透析过夜;

    2. 将rec-Protein A-Sepharose装柱固定好,用10倍柱体积1× PBS(pH 7.4)平衡层析柱,建议流速为1 mL/min;

    3. 将透析好的样品从层析柱上端加入,建议流速为1 mL/min,为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样,重复2遍(或将样品1次性加入层析柱后置于摇床上,轻轻摇动,结合30 min);

    4. 样品结合后,用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱,建议流速为1 mL/min,勿让层析柱滴干;

    5. 洗脱IgG,向层析柱上端加入洗脱液(100 mM甘氨酸,pH 2.7),用预先加有100 μL中和缓冲液(1M Tris,pH 9.0)的4 mL Ep管接收,2 mL /管,共收集10倍柱体积,进行10 % SDS-PAGE电泳,确定IgG样品所在管,回收样品。

    6. 用5倍柱体积再生缓冲液(100 mM甘氨酸,pH 2.0)进行再生处理,再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。最后于层析柱中加入10倍柱体积, 20% Ethanol,4~8 ℃冰箱保存处理。

    l 同类产品纯化效果比较

      美国某知名品牌的rProtein A Sepharose 4FF 亲和层析柱对人血清进行纯化,其对人IgG的最大结合量约为34 mg/mL Medium。 

    表1 rProtein A与不同来源Ig的反应活性情况

    IgG类型

    Protein A

    IgG类型

    Protein A

    IgG类型

    Protein A

    人 IgG1

    ++++

    小鼠 IgG2b

    +++

    仓鼠 Ig

    +

    人 IgG2

    ++++

    小鼠 IgG3

    ++

    豚鼠 Ig

    ++++

    人IgG3

    -

    小鼠 IgM

    +/-

    牛 Ig

    ++

    人IgG4

    ++++

    大鼠 IgG1

    -

    ++

    人IgA

    ++

    大鼠 IgG2a

    -

    奶牛

    ++

    人n IgD

    ++

    大鼠 IgG2b

    -

    +++

    人IgE

    ++

    大鼠 IgG2c

    +

    绵羊

    +/-

    人 IgM

    ++

    大鼠 IgM

    +/-

    山羊

    -

    小鼠 IgG1

    +

    兔 Ig

    ++++

    小鼠 IgG2a

    ++++

    鸡 Ig

    -

    表2 rProtein A预装柱系列产品参数

    特性

    rProtein A

    特性

    rProtein A

    柱体积规格

    1mL,5mL

    填料稳定性

    >20纯化周期

    基质组成

    4%高交联度琼脂糖

    pH稳定性

    pH 2~11

    基质平均粒径

    90μm

    推荐工作pH范围

    pH 3~10

    功能基团

    rProtein A:34.85kDa;

    IgG结合位点:4

    推荐在位清洗pH范围

    pH 2~11

    配基密度

    ≈3mg rProtein A/mL 基质

    工作温度

    4~40℃

    结合能力

    30-55mg人IgG/mL填料

    运输条件

    20%乙醇浸泡,室温运输

    推荐流速

    30~150cm/mL

    贮藏条件

    20%乙醇条件下,

    4~8℃保存